奥根诊断CompliNeF™ Assay ：从 Bb 保留量读出 C3NeF 功能

2026-09-23

一个可靠的 C3NeF 检测，既要能反映 C3 转化酶的功能变化，又要尽量减少抗 IgG 信号的干扰。如果把 C3NeF 当作普通自身抗体来检测，容易遇到两类问题：一类是只能证明抗体结合了转化酶，却无法证明它稳定了转化酶[4]。结合实验多用抗人 IgG 二抗读取患者 IgG，抗补体因子 B（CFB）抗体等可与 C3bBb 结合的 IgG 同样会被读到，容易形成假信号[2]。另一类是只能读到下游效应，无法区分放大的来源，功能实验的溶血读数受多种补体组分共同影响，属于间接推断[2]。

理想平台的读数应直接反映 C3NeF 对 C3 转化酶的形成与稳定作用，并尽量减少对患者 IgG 信号的依赖。奥根诊断的做法是检测 Bb 的保留量，而不检测 IgG。

CompliNeF™ Assay：读取洗涤后保留在磁珠上的 Bb

CompliNeF™ Assay 的设计核心，是在磁珠上构建一个微型转化酶反应。首先，以 C3b 包被磁珠为基础，加入补体因子 B（complement factor B, CFB）与补体因子 D（complement factor D, CFD），形成 C3bBb。待测血浆中如果存在 C3NeF，就会跨越 C3b 与 Bb 的界面稳定 C3bBb[1,3]。然后经充分洗涤后，读取仍保留在磁珠上的 Bb。

选择读 Bb 而不是读 IgG，原因在于 Bb 是转化酶被稳定后实际留下的组分。保留量的多少，对应 C3NeF 对转化酶形成与稳定的综合作用。这一步绕开了抗人 IgG 二抗，从原理上降低了抗 CFB 抗体等可与 C3bBb 结合的 IgG 带来的干扰[5]。

选择磁珠作为反应载体的验证过程

选择磁珠作为反应载体，有前期的实验支持。在原料与反应条件的探索中，我们观察到两点：

其一，原料纯度经 SDS-PAGE 验证。C3b 的 α′ 链约 105 kDa、β 链约 75 kDa，补体因子 B 约 93 kDa，补体因子 D 约 24 kDa，各原料均在相应分子量附近出现主条带，可用于后续 C3bBb 形成与切割条件的探索。

其二，CFD 的切割存在体系差异。在酶标板固相体系中，CFB 难以被 CFD 有效切割；在液相与磁珠固相体系中，切割则可有效进行[5]。CFB 需先结合 C3b 方能成为 CFD 的底物，这一特征也说明磁珠固相更贴近液相中的天然装配条件。板面固定可能影响 C3b 构象、CFB 结合或 CFD 接近底物。平台路线的确定，依据的是这些反应条件上的事实。

CompliNeF™ 法与间接 ELISA 的初步比较

基于方法学方向上的初步观察显示，在基于 CompliNeF™ 的 Bb 保留法与间接 ELISA 的对比中，前者对阳性患者样本的信号值更高[5]。间接 ELISA 以抗人 IgG 读取 C3NeF，而本平台读 Bb 保留量；阳性样本信号更高，提示对功能性 C3NeF 的捕获更充分。

CompliNeF™ Assay 的另一个设计目标，是把 Bb 保留量转化为可比较、可质控的信号，以形成指数（formation index，FI）表达 C3NeF 的相对作用，便于批内比较与质量控制[5]。

回到最初的标准：读数指向功能（形成与稳定），不依赖抗 IgG 通道，且可以量化，因而能够纳入质控。三者指向同一个目标，即让每个数值都对应一个明确、可解释的转化酶事件。

参考资料

1. Corvillo F, Okrój M, Nozal P, et al. Nephritic Factors: An Overview of Classification, Diagnostic Tools and Clinical Associations. Front Immunol. 2019;10:886. PMID: 31068950

2. Michels MAHM, Volokhina EB, van de Kar NCAJ, van den Heuvel LPWJ. Challenges in diagnostic testing of nephritic factors. Front Immunol. 2022;13:1036136. PMID: 36451820

3. Welsh SJ, et al. Monoclonal nephritic factors reveal insights into C3 convertase dynamics and dysregulation. bioRxiv [Preprint]. 2026 Jun 12:2026.06.11.731599.

4. Zhao F, Afonso S, Lindner S, et al. C3-Glomerulopathy Autoantibodies Mediate Distinct Effects on Complement C3- and C5-Convertases. Front Immunol. 2019;10:1030. PMID: 31214159

5. 奥根诊断（AlloDx）. CompliNeF™ Assay 方法学验证与性能探索资料。

本文涉及的方法学与内部研究数据均处于研发/验证阶段，不构成已上市产品的效能承诺；相关表述须以最终注册证、说明书及最新指南为准。文中"信号值更高"等内部探索性数据，非临床疗效或诊断性能结论。